НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76 (ССЯ-76) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Название (рус.)
НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76 (ССЯ-76) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ
Состав и форма выпуска
В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу ССЯ-76 сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная,0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ-76, цельная, лиофилизированная, 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); КЗ - очищенный антиген вируса ССЯ-76, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин 20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1 г - 1 шт. в упаковке. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов.
Фармакологические свойства
Сущность метода заключается в выявлении образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета комплекса антиген-антитело. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета.
Показания
Для определения специфических антител против вируса снижения яйценоскости (ССЯ-76)в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).
Дозы и способ применения
Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2., добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5,0 при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Раствор № 4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10,0 мл раствора №1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор №7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса ССЯ 76, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток. Образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1,0 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают. Готовят раствор № 7 и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль ( при раститровке) окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Положительными считают пробы, начиная с 1 : 400 и выше. При оценке результатов без раститровок испытуемых сывороток реакцию расценивают по принципу - <да> - положительная реакция - в пробе выявлены - обнаружены специфические антитела к вирусу ССЯ 76 или <нет> - отрицательная реакция - в пробе отсутствуют специфические антитела. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении (1 : 400). Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 ...Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 1(2) лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контроль
ные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого варианта учета различия между средними значениями положительной и отрицательной контрольных сывороток (PСx - NСx) должно быть более 0,5. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ССЯ 76 определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ССЯ 76. Если S/Р отношение меньше или равно 0,068 сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение в диапазоне 0,068 - 0,184 означает, что проба сомнительная. Если S/Р отношение больше чем 0,184, сыворотка содержит антитела к ССЯ 76. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р отношению при разведении 1 : 400.

Расчет титра.

Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NСx):
(Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NСx
Пример: (0,036 + 0,040)/2 = 0,038 (NСx = 0,038).

Расчет среднего значения ОП положительного контроля (PСx):
(Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PСx
Пример: (0,564 + 0,600)/2 = 0,582 (PСx = 0,582).

Расчет S/Р отношения:
(ОП(492) испытуемой сыворотки - NСx) / (PСx - NСx) = S/P
Пример: Значение образца = 0,351
(0,351 - 0,038)/(0,582 - 0,038) = 0,313/0,544 = 0,574 (Значение S/Р=0,575).

Расчет титра. log10Титр = 1,436*(log10S/Р) + 4,126. Пример: S/Р отношение равно 0,575. log10Титр = 1,436*(log100,575) + 4,126. log10Титр = 1, 436* (-0,240)+ 4,126. log10Титр = 3,7814. Титр = 103,856 = 6045. Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 800 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к синдрому снижения яйценоскости при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 800 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют ) при напряженности иммунитета менее 80 %. Выявление специфических антител в сыворотках крови кур в титрах 1 : 400 и выше пробах сывороток различных возрастных групп птиц в 100 - 120, 150 - 180 и 200 - 270 дней, не вакцинированных против ССЯ 76, является основанием для постановки диагноза на болезнь кур ССЯ 76. При этом учитывают эпизоотическую ситуацию в хозяйстве, снижение яичной продуктивности в пик яйцекладки, снесение депигментированных, шероховатых, с истонченной скорлупой яиц, а также наличие клинических и патологоанатомических признаков заболевания. Обнаружение положительных проб сывороток крови при эпизоотическом исследовании кур, ранее не вакцинированных против ССЯ 76, свидетельствует о циркуляции в стаде возбудителя болезни и служит основанием для дополнительных исследований по уточнению диагноза и проведения оздоровительных мероприятий.
Особые указания
Ампулы, флаконы без этикеток, с трещинами, с измененной консистенцией подлежат выбраковке и обеззараживанию и утилизации.
Условия хранения
В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 12 месяцев.
Производитель
Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия

Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru

Подробнее о производителе

Продавец
Место Вашей рекламы

   

 

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru

 

 

Ваш источник информации о новых препаратах?

Поделиться:
Инфракрасные лампы
Флай Байт