НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Название (рус.)
НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ
Состав и форма выпуска
В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу ИББ сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИББ, цельная, лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К3 - очищенный антиген вируса ИББ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин 20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1 г - 1 шт. в упаковке. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов.
Фармакологические свойства
Сущность метода заключается в выявлении образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета комплекса антиген-антитело. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета.
Показания
Для определения специфических антител против вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).
Дозы и способ применения
Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2., добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5, при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования по вышеописанному способу. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1 мл раствора № 1. Раствор №4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования по вышеописанному способу. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора № 1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор № 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса ИББ, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток. Образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных по вышеописанной схеме, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают. Готовят раствор № 7 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении 1 : 400. Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 ...Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 2 лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого в
арианта учета различия между средними значениями положительной и отрицательной контрольных сывороток (PCx - NCx) должно быть не менее 0,4. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ИББ определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ИББ. Если S/Р отношение меньше или равно 0,13, сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение находится в диапазоне значений 0,13 - 0,17, сыворотка считается сомнительной. Если S/Р отношение больше чем 0,17, проба считается положительной. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р-отношению при разведении 1 : 400. Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NCx):
(Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NCx
Пример: (0,100 + 0,120)/2 = 0,110 (NCx = 0,110).
Расчет среднего значения ОП положительного контроля (PCx):
(Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PCx
Пример: (0,720 + 0,690)/2 = 0,755 (PСx = 0,755).
Расчет S/Р отношения:
(ОП(492) испытуемой сыворотки - NCx)/(PCx - NCx) = S/P
Пример: Значение образца = 0,480
(0,480 - 0,110)/(0,755 - 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Значение S/Р = 0,574).
Расчет титра: log10Титр = 2,01(log10S/Р) + 3,98. Пример: S/Р отношение равно 0,574
log10Титр = 1,08(log100,574) + 3,98. log10Титр = 1,08(-0,241)+3,98. log10Титр = 3,660. Титр = 103,660 = 4571. Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 400 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к вирусу ИББ при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е. если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 400 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение высокого уровня антител более 1 : 400 свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИББ. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИББ является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.
Особые указания
Ампулы, флаконы без этикеток, с трещинами, с измененной консистенцией подлежат выбраковке и обеззараживанию и утилизации.
Условия хранения
В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности набора - 12 месяцев.
Производитель
Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия

Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru

Подробнее о производителе

Продавец
Место Вашей рекламы

   

 

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru

 

 

Ваш источник информации о новых препаратах?

Поделиться:
Флай Байт