ВЕТТОРГ ⇨ Каталог препаратов ⇨ НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ (НБ) В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РТГА)

НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ (НБ) В РЕАКЦИИ ТОРМОЖЕНИЯ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ (РТГА)

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

В состав набора входят следующие компоненты - Иммуноспецифические компоненты: № 1 антиген специфический вируса НБ, лиофилизированный - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 4 мл - 2 флакона; № 2 гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу НБ (положительный контроль), цельная, лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон; № 3 нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к НБ, цельная, лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон. Неспецифические компоненты: № 4 набор солей для приготовления забуферного физиологического раствора: натрий хлористый, натрий фосфорнокислый двузамещенный и калий фосфорнокислый однозамещенный - порошок белого цвета, 10,2 г - 1 флакон; № 5 натрий лимоннокислый - порошок белого цвета, 3,0 г - 1 флакон; № 6 микропанели полистироловые круглодонные для иммунологических реакций, 96 луночные - 4 штуки. Набор рассчитан на анализ 500 проб сывороток крови кур.

Фармакологические свойства

Принцин метода основан на способности сывороток крови кур, содержащих специфические антитела, тормозить гемагглютинирующую активность антигена НБ.

Показания

Для выявления специфических антител к вирусу ньюкаслской болезни (НБ) в сыворотках крови кур в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) в микроварианте.

Дозы и способ применения

Для постановки реакции используют: одно и восьмиканальные пипетки любой модели с варьируемым или стабильным объемом в пределах 0,025 - 0,05 мл. Для приготовления забуференного физиологического раствора растворить содержимое флакона №4 в 1 л дистиллированной воды. Для приготовления 3% раствора лимонокислого натрия рстворить содержимое флокона №5 в 100 мл забуференного физиологического раствора. Подготовка антигена. Антиген во флаконах ресуспендируют в забуфернном физиологическом растворе до исходного объема (4 мл). Приготовление взвеси эритроцитов петуха. Кровь берут из подкрыльцовой вены во флаконы с 3% раствором лимоннокислого натрия на забуференном физиологическом растворе ( рН 7,2 - 7,4) в соотношении 1 : 2, трижды отмывают забуференном физиологическом растворе путем центрифугирования при 1500 об/мин. Из осадка эритроцитов на забуференном физиологическом растворе ( рН 7,2 - 7,4) готовят 0,7 % суспензию. Для этого в 99,3 мл забуференного физиологического раствора добавляют 7,7 мл концентрата эритроцитов (осадок). Хранить суспензию можно в условиях холодильника (+4 °С) до появления признаков гемолиза эритроцитов. Получение сыворотки крови. Кровь берут из подкрыльцовой вены или путем скарификации гребня, собирают в стерильные пробирки, предваритедьно увлажненные стерильным физиологическим рствором. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок тонким металлическим стержнем или пастеровской пипеткой и выдерживают при комнатной температуре (18 - 20 °С) в течение 12 - 18 часов или при температуре 37 °С (в термостате) в теченин 60 мин, а затем 8 - 10 ч при +4 °С (в холодильнике). Отстояшуюся сыворотку сливают в чистые пробирки и исследутся в РТГА. Для удаленя термолибильных ингибиторов сыворотку крови прогревают в водяной бане при 56 °С в течение 30 минут РТГА проводят в два этапа: определнние гемагглютинирующего титра антигена в реакции гемагглютинации (РГА) для расчета рабочей дозы; определение титра антител в пробах сыворотки крови. Постановка реакции гемагглютинации - для постановки РГА готовят двукратные разведения антигена от 1 : 2 до 1 : 4096. С этой целью во все лунки полистироловой панели пипеткой разливают забуференный физиологический раствор (0,05 или 0,025 мл), в первую вносят равный объем антигена, трехкратно пипетируют и переносят по 0,05 или 0,025 мл во вторую лунку и т. д. Из последней лунки удаляют по 0,05 или 0,025 мл соответственно. После разведения антигена во все лунки вносят 0,7 % суспензию эритроцитов петуха в объеме, равном исходному объему забуференного физиологического раствора. Микропанели аккуратно встряхивают и оставляют при комнатной температуре (18 - 20 °С). Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле. Для контроля эритроцитов на спонтанную гемагглютинацию и определения времени учета реакции в две лунки с забуференным физиологическим (0,05 или 0,025 мл) добавляют равный объем эритроцитов РГА оценивают положительно при оседании эритроцитов в виде хорошо выраженного <зонтика>, отрицательно - в виде <пуговки>. За титр антигена принимают его наибольшее разведение, показывающее четко выраженную агглютинацию в виде <зонтика>. (Примечание: Получение нечетких результатов может быть связано с изменившимся рН забуференного физиологического раствора.). Для постановки РТГА готовят рабочую дозу антигена (4 ГАЕ), исходя из его титра. Для этого исходный антиген разводят забуференным физиологическим раствором во столько раз, сколько получают от деления его титра на 4. Например: титр антигена 1 : 256. Для приготовления рабочего разведения необходимо взять 63 мл забуференного физиологического раствора и 1 мл исходного антигена (256 : 4 =64). Объем рабочей дозы антигена определяют, исходя из количества подлежащих исследованию сывороток. Для постановки РТГА микрометодом на исследование 1 сыворотки в 12 разведениях требуется 0,6 или 0,3 мл 4 ГАЕ антигена (в зависимости от первоначального объема забуференного физиологического раствора). Рабочую дозу антигена готовят непосредственно в день постановки реакции с обязательным контролем 4 ГАЕ. Для этого в 4 лунки разливают забуференный физиологический раствор в объемах, выбранных для постановки реакции. В первый добавляют равный объем рабочей дозы антигена и титруют согласно вышеописанной схеме. Учет реакции проводят после оседания эритроцитов в контроле. При правильном определении рабочей дозы в первой, второй лунках должна быть полная агглютинация (<зонтик>), в третьей частичная, в четвертой - отсутствие агглютинации (<пуговка>). Полная агглютинация в третьей лунке означает, что доза антигена завышена, а отсутствие агглютинации в первой или во второй лунках - свидетельствуют о недостаточном его количестве. Корректирование рабочей дозы (увеличение или уменьшение) проводят путем добавления антигена или забуференного физиологического раствора с обязательным повторным контролем 4 ГАЕ. Постановка РТГА - Для постановки реакции во все лунки полистироловой планшеты вносят забуференный физиологический раствор в объеме 0,05 (0,025) мл. Затем в первую лунку добавляют равный объем испытуемой сыворотки, трижды пипетируют и готовят ряд последовательных двукратных разведении (с 1 : 2 до 1 : 4096). После этого, во все лунки вносят рабочее разведение антигена в объеме 0,05 (0,025) мл, осторожно встряхивают и после 20 - 30 минут контакта сыворотки с антигеном в каждую лунку добавляют двойной объем (по отношению к объему забуференного физиологического раствора) суспензии эритроцитов. Контроли: сыворотки на изоагглютинацию (сыворотка + забуференный физиологический раствор в равных объемах + 0,7 % суспензия эритроцитов в двойном объеме). Агглютинация должна отсутствовать; эритроцитов на спонтанную агглютинацию (суспензия эритроцитов + забуференный физиологический раствор в равных объемах). Агглютинация должна отсутствовать; положительной специфической сыворотки (положительного контроля). Титр контрольной положительной сыворотки указан на флаконе + одно разведение. Реакцию учитывают через 25 - 40 минут. При наличии в сыворотке антител наблюдают торможение гемагглютинации - эритроциты выпадают в осадок в виде <пуговки>. Титром сыворотки - считают наибольшее ее разведение, дающее полное торможение гемагглютинации рабочей дозы антигена НБ. Интерпретация полученных результатов: По результатам РТГА определяют эффективность иммунизации в партии привитых цыплят путем деления суммарного количества проб с титром антител 1 : 8 и выше (после применения живых вакцин) или 1 : 16 (после применения инактивированных вакцин) на общее число исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают невосприимчивой к НБ при эффективности иммунизации 80 и более процентов после применения живых вирусвакцин и 90 и более процент
ов после использования инактивированных препаратов. При эффективности иммунизации менее 80 % после применения живых вирусвакцин и менее 90 % после применения инактивированных вирусвакцин птица подлежит повторной вакцинации. Обнаружение в РТГА высокого титра антител (1 : 2048 и выше у птиц, привитых живыми вакцинами, и 1 : 4096 и выше у птиц, привитых инактивированными вакцинами) свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ньюкаслской болезни. В таких случаях через 21 - 30 суток проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Снижение или стабилизация уровня антител и (или) уменьшение количества птиц с высоким уровнем антител при повторных исследованиях проб сыворотки крови свидетельствует об отсутствии циркуляции в хозяйстве эпизоотического вируса и является следствием поствакцинальных реакций. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при отсутствии клинических и патологоанатомических признаков НБ не является основанием для объявления хозяйства неблагополучным по данному заболеванию, но предусматривает установление за птицей тщательного наблюдения, проведения систематических серологических и вирусологических исследовании. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинико-патологоанатомических признаков заболевания служит основанием для проведения детального эпизоотологического обследования хозяйства и установления окончательного диагноза по данному заболеванию. Обнаружение антител к вирусу ньюкаслской болезни у птиц, не привитых против НБ без клинических и патологоанатомических признаков заболевания свидетельствует о циркуляции полевых лентогенных штаммов вируса ньюкаслской болезни и не является основанием для объявления хозяйства неблагополучным по НБ. За птицей таких хозяйств устанавливают постоянное наблюдение.

Особые указания

Не предусмотрены.

Условия хранения

В сухом темном месте при температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия

Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru

Подробнее о производителе

Продавец

Место Вашей рекламы

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru