НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К БАКТЕРИЯМ РОДА SALMONELLA В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КУР ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ
- Название (рус.)
- НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К БАКТЕРИЯМ РОДА SALMONELLA В СЫВОРОТКАХ КРОВИ КУР ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ
- Состав и форма выпуска
- Представляет собой набор иммуноспецифических и неспецифических компонентов. В состав набора входят - Иммуноспецифические компоненты: К1 - гипериммунная сыворотка крови кур к бактериям рода Salmonella (положительный контроль) цельная лиофилизированная сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к бактериям рода Salmonella цельная, лиофилизированная, сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 ампула (флакон); К3 - жгутиковый антиген S.enteritidis (H : g,m) адсорбированный по 0,1 мл в лунках планшета для ИФА 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухая мелкопористая масса белого цвета, 0,3 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1 : 200 (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3),порошок белого цвета - по 1 флакону; К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный 12 водный - 5,37 г (К6.1), порошок белого цвета - 1 флакон, лимонная кислота - 1,57 г (К6.2), порошок белого цвета - 1 флакон; К7 - детергент твин 20, жидкий - 1,0 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, таблетка 8 мг - 2 шт. во флаконе, (1 шт. на 15 мл раствора №2); К9 - гидроперит, таблетка 0,5 г - 1 шт. в упаковке. Ампулы с компонентами набора упаковывают в картонные или пластиковые коробки с наличием гнезд или перегородок, обеспечивающих неподвижность и целостность флаконов.
- Фармакологические свойства
- Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток двукратным шагом от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов, при раститровке сывороток четырехкратным шагом от 1 : 100 до 1 : 12800 - 200 анализов.
- Показания
- Для выявления специфических гуморальных антител в сыворотках крови кур к жгутиковому антигену бактерий рода Salmonella иммуноферментным методом (ИФА).
- Дозы и способ применения
- Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр (тип 121 или 340), спекторофотометр с вертикальным лучом или ридер любой модели с фильтром на 492 нм для учетов результатов ИФА. Приготовление растворов: перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре (18 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 1 хранят не более 20 суток при температуре 4 °С. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 растворяют в другой мерной колбе в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5, при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 0,3 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Допускается хранение в течение 3 суток при 4 °С. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Раствор № 4 готовят перед использованием, допускается хранение в течение 3 суток при 4 °С. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : 100 из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают 0,1 мл на 10 мл раствора №1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита (К9) растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (1 таблетку) растворяют в 15 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 0,6 мл раствора № 6. Готовят раствор № 7 непосредственно перед использованием. Постановка реакции. Из комплекта набора берут один планшет (КЗ), в лунках которого адсорбирован жгутиковый антиген SE и используют для постановки иммуноферментного анализа. Разведение сывороток. Образцы контрольных сывороток и исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 400 раствором № 1. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1,0 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки планшета от А2 - 12 ... до Н2 - Н12 включительно вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток крови. В лунки В1 и С1 вносят контрольную гипериммунную сыворотку (положительный контроль), а в D1 и Е1 контрольную неиммунную сыворотку (отрицательный контроль). Лунки F1 и G1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствора № 1. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на (37 + 0,5 °С) на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем встряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на (37 + 0,5 °С) на 1 час и промывают как при постановки реакции. Готовят раствор № 7 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при температуре (20 + 0,5 °С) в темном месте на 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты (в наборе отсутствует) в 10 мл дистиллированной воды. В случае отсутствия инструментального учета выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить с раститровкой испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки рядов планшета В1 - 12 ... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови в разведении 1 : 100, приготовленных следующим образом: к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1,0 мл раствора № 1 , и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А2 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (нормальной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Учет результатов реакции. Проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. Оценка и интерпретация результатов. Использование предлагаемого набора позволяет: дифференцировать испытуемые сыворотки на категории положительно, отрицательно или сомнительно реагирующие; определить титр антител испытуемой положительно реагирующей сыворотки. Дифференциация сывороток (качественная оценка): а) Визуальная оценка - При визуал
ьном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Положительными считают пробы, начиная с разведения 1 : 1000 и выше, отрицательными - 1 : 400 и меньше, сомнительными - в диапазоне от выше 1 : 400 и ниже 1 : 1000. б) Инструментальная оценка - Реакцию контролируют по отношению значений оптической плотности положительного контроля (лунки С1 и В1) к значениям оптической плотности отрицательного контроля (лунки Е1 и D1) по каждому планшету:
Пример: (С1+В1)/(E1+D1) = (1,252 + 1,614)/(0,135 + 0,155) = 9,88.
Если отношение положительного к отрицательному контролю меньше 2,5, то результаты по данному планшету не учитывают. Если это отношение больше 2,5, то результаты учитывают. В данном примере отношение равно 9,88, то есть больше 2,5, следовательно результат учитывают. Высчитывают среднее значение отрицательного контроля (ОК):
(E1+D)/2 = (0,135 + 0,155)/2 = 1,45
Высчитывают среднее значение положительного контроля (ПК):
C1/2 = (1,252 + 1,614)/2 = 1,433
Определяют отношение значения исследуемой пробы сыворотки (ИС) к положительному контролю:
(ИС - ОК)/(ПК - ОК) = (0,415 - 0,145)/(1,433 - 0,145) = 0,210
Если отношение ИС/ПК равно или меньше 0,2, это означает, что проба отрицательная; Если отношение ИС/ПК равно 0,21 - 0,29 это означает, что проба сомнительная. Если отношение ИС/ПК равно или больше О 3, это означает, что проба положительная. Определение титра антител (количественная оценка): а) Визуальный учет - Сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контрольным образцом. Положительными считают пробы, начиная с разведения 1 : 1000 и выше, отрицательными - 1400 и меньше, сомнительными - в диапазоне от выше 1 : 400 и ниже 1 : 1000; б) Инструментальный учет - При инструментальном фотометрическом учете результатов анализа конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2 - 2,1 раз; в) Расчет титра сыворотки по одному разведению (1 : 400) проводят по формуле: log10 ТИТР = 1 16 (log10 ИС/ПК) + 3,53. Пример: Отношение ИС/ПК=0,210. log10 ТИТР = 1,16(log10 0,210) + 3,53. log10 ТИТР = 1,53(-0,677) + 3,53. log10 ТИТР = 2,74. ТИТР = Аntilog 2,74. ТИТР = 554. Положительные результаты анализа сывороток крови кур, полученные при анализе с применением набора должны быть подтверждены бактериологическими исследованиями для решения вопроса о благополучии птицефермы по сальмонеллезу. - Особые указания
- Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора. Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном. Использованные планшеты обеззараживают 3 % раствором хлорной извести или другими сильными окислителями. Утилизация наборов, не прошедших контроль, а также с истекшим сроком годности не требует специальных мер безопасности.
- Условия хранения
- В сухом, темном месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 12 месяцев. Не допускается хранение при минусовой температуре.
- Производитель
- Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия
Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru - Продавец
- Место Вашей рекламы
По вопросам размещения информации
о ветеринарных препаратах и кормовых добавках
в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"
и заключения договоров на публикацию
обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru
