НАБОР АНТИГЕНА И КОНТРОЛЬНОЙ ПОЗИТИВНОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ АЛЕУТСКОЙ БОЛЕЗНИ НОРОК

Название (рус.)
НАБОР АНТИГЕНА И КОНТРОЛЬНОЙ ПОЗИТИВНОЙ СЫВОРОТКИ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ АЛЕУТСКОЙ БОЛЕЗНИ НОРОК
Состав и форма выпуска
Антиген готовят путем экстрагирования вируса из лимфоидной ткани инфицированных норок. Представляет собой коричневую или синевато-бирюзовую прозрачную жидкость, в 1 мл которой содержится 100 тест-доз. Выпускают в герметически закрытых стерильных флаконах по 5; 10; 12,5; 25 мл. Контрольная позитивная сыворотка представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую бесцветную жидкость. Выпускают в стерильных ампулах или флаконах по 1 мл (100 тест-доз). Один набор содержит 2500 тест-доз. В коробке - 5 наборов.
Фармакологические свойства
Стерильный (неинфекционный) антиген серологически активен в реакции иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ). Принцип реакции заключается в образовании комплексов антиген-антитело (АГ-АТ) в виде полос преципитации в агаровом геле. Набор пригоден для использования в других серологических реакциях (реакция радиальной иммунодиффузии, линейного электрофореза и др.), но в практических условиях наибольшее удобство и чувствительность обеспечивается в РИЭОФ.
Показания
Предназначен для обнаружения антител к вирусу алеутской болезни в сыворотке крови норок. Наличие антител указывает на зараженность норок алеутской болезнью. Применение диагностикума позволяет ликвидировать алеутскую болезнь в стаде путем выбраковки.
Дозы и способ применения
Исследование крови норок на алеутскую болезнь посредством РИЭОФ проводят ветспециалисты звероводческих хозяйств (после специальной подготовки), ветеринарных лабораторий и научно-исследовательских учреждений. Исследования проводят в порядке, предусмотренном действующей инструкцией по борьбе с алеутской болезнью норок. Приборы, оборудование и компоненты для РИЭОФ. Для постановки РИЭОФ используют прибор для электрофореза ПЭФ-3, ЭФ-2 или аналогичных марок, вакуумный насос с электродвигателем, осветитель ОИ-19 или настольную лампу с металлическим или пластмассовым абажуром, столик с уровнем для разлива расплавленного агара, прибор для определения рН раствора (иономер ЭФ-74 или аналогичный), пробойник диаметром 2,5 мм для изготовления лунок в агаровом геле, резиновую трубку, стеклянные пластинки 6 - 15 см, направляющую пластинку из оргстекла для пробойника, пипетки градуированные на 10 - 25 мл, капилляры стеклянные для взятия крови у норок, мерные колбы на 100 - 1000 мл, кюветы эмалированные, агар для электрофореза, бумагу фильтровальную, мединал (барбитал натрия), веронал (барбитал), дистиллированную воду. Приготовление буферных растворов. Для РИЭОФ применяют мединал-вероналовый или другие буферные растворы с рН 8,6 - 8,9, пригодные для электрофореза белков. Мединал-вероналовый буфер готовят путем растворения 10,32 г мединала в 300 мл дистиллированной воды и последующего добавления 1,84 г веронала. Раствор помещают и держат в водяной бане при 40 °С до полного растворения веронала. Затем раствор доводят дистиллированной водой до объема 1 литр и измеряют рН. В том случае, если реакция приготовленного мединал-вероналового раствора получилась ниже 8,6 - следует добавить мединал, а если выше - веронал. После добавления мединала или веронала каждый раз определяют рН раствора, доводя его до нужной концентрации. Буферный раствор при массовых исследованиях используют в течение трех-четырех дней. При ухудшении линий преципитации в контроле следует заменить раствор и проверить активность диагностикума. Подготовка пластинок с агаром для РИЭОФ. На чистую обезжиренную стеклянную пластину размером 8 х 15 см наливают 30 мл 1 % горячего раствора агара, приготовленного на буфере, разведенном пополам дистиллированной водой. После застывания в агаровом геле делают лунки при помощи пробойника, соединенного трубкой с вакуумным насосом. Всего на агаровой пластинке делают 206 лунок с таким расчетом, чтобы получилось десять полных горизонтальных рядов по 20 лунок в каждом и одиннадцатый нижний неполный (для контроля) с шестью лунками, размещенными парами слева, справа и в середине ряда. Диаметр лунок должен быть 2,5 мм, глубина - 2,5 мм, фактический объем около 0,01 см³, расстояние между центрами соседних лунок каждого горизонтального ряда - 6 мм. Края агаровой пластинки на расстоянии не менее 1 см не должны иметь лунок. Для более точного расположения лунок используют заранее размеченную миллиметровую бумагу, которую кладут под стеклянную пластинку, или накладывают направляющую пластинку из оргстекла с просверленными для пробойника отверстиями. При единичных исследованиях можно использовать предметные стекла или стеклянные пластинки меньшего размера. После разлива агара пластинки должны быть использованы не позднее двух часов при хранении во влажной камере (камера для электрофореза, эксикатор и т. д.). Постановка РИЭОФ. Кровь для исследования у норок берут в стеклянные капилляры, которые с одного конца закрывают пластилином и центрифугируют при 1500 - 3000 об/мин в течение 5 минут. Затем отламывают часть капилляра с сывороткой и, не допуская ее разбрызгивания, осторожно выдувают при помощи специальной груши или резиновой трубки в очередную лунку четного вертикального ряда. При необходимости можно использовать цельную кровь, осадок эритроцитов, гемолизированную или хилезную сыворотку. Для контроля реакции в четные лунки 11 горизонтального неполного ряда вносят положительную контрольную сыворотку. Антиген закапывают пастеровской пипеткой во все лунки нечетных вертикальных рядов (включая контрольные) и помещают пластинку в камеру электрофореза с тем расчетом, чтобы ток проходил параллельно горизонтальным рядам. К краям пластинки прикрепляют по 4 - 5 полосок фильтровальной бумаги и опускают их свободные концы в ванны с буферным раствором, наполненные примерно на 2/3 объема. Камеру закрывают крышкой и подключают к выпрямителю тока так, чтобы положительный полюс был справа (со стороны крайнего вертикального ряда с сыворотками). Сила тока должна быть 10 - 15 миллиампер на каждую стеклянную пластинку (0,08 - 0,12 мА/см²), напряжение на выходе - 120 - 220 Вт. Требуемые параметры тока (по показаниям приборов выпрямителя) достигаются путем изменения количества полосок фильтровальной бумаги, если регулировка тумблером не приводит к желаемому результату. Учет реакции. Предварительную читку реакции проводят через 15 - 45 минут после размещения пластинки в силовом поле. Для этого отключают от сети выпрямитель, открывают крышку камеры, вынимают пластинку и просматривают ее в косопроходящем свете (осветитель ОИ-19 или другие источники света) на темном фоне в затемненном помещении. Положительная РИЭОФ характеризуется наличием тонкой четкой прямой линии преципитации в горизонтальных рядах геля примерно на середине расстояния между лунками с сывороткой и антигеном. Расплывчатые полосы в геле, диффузные или ограниченные изменения его прозрачности, а также отсутствие изменений расценивается как отрицательный результат. Окончательную читку реакции проводят после экспозиции стекла с агаровой пластинкой в гипертоническом растворе (12,5 %) хлористого натрия в течение 7 - 10 минут и последующего отмывания в дистиллированной воде (6 - 18 часов) для удаления неспецифических полос сывороточного белка. При обнаружении едва различимой линии преципитации результат РИЭОФ считается сомнительным. В этом случае реакцию ставят повторно с новой пробой сыворотки. Подтвержденный сомнительный результат РИЭОФ засчитывают как положительный. Показания РИЭОФ признают действительными, если на данной пластинке в 11 горизонтальном ряду, во всех трех контролях будет ясно выражена линия преципитации. Положительный результат РИЭОФ указывает на заражение норок алеутской болезнью и на необходимость изолированного их содержания до момента убоя. В необходимых случаях испытывают не только цельные сыворотки, но и их последовательные разведения. Для титрования антител у обследуемых норок берут кровь в пробирки в объеме не менее 1 - 3 мл и получают сыворотку общепринятым способом, затем готовят последовательные двукратные разведения в физиологическом растворе от 1 : 2 до 1 : 262144 при помощи микротитратора Такачи или микропипеток. Каждое разведение испытуемой сыворотки вносят в отдельную лунку четных вертикальных рядов: в нечетные ряды закапывают не
разведенный стандартный антиген и пластинку помещают в камеру для электрофореза на 15 - 45 минут. Одновременно ставят контроль положительной стандартной сыворотки, начиная с разведения 1 : 2 до 1 : 64 со стандартным антигеном. Затем проводят учет реакции. За титр антител в испытуемой сыворотке принимают наибольшее ее разведение, в котором произошла реакция, при одновременном положительном результате с контрольной позитивной сывороткой в предельном (1 : 64) или половинном (1 : 32) титре. При титровании антигена готовят последовательные двукратные его разведения от 1 : 2 до 1 : 4 в физрастворе. В лунки четных рядов вносят неразведенную контрольную позитивную сыворотку, а в нечетные ряды - антиген в последовательных разведениях. Пластинку помещают в камеру для электрофореза и через 15 - 45 минут проводят учет реакции.
Особые указания
Результат исследования крови норок в хозяйствах записывают в акте с указанием даты проведения исследований, количества и процента реагирующих норок по отделениям и бригадам, наименование диагностикума, номера его серии, контроля, предприятия-изготовителя, срока годности, фамилии, имени и отчества ветработника, проводившего исследования. Один экземпляр хранят в хозяйстве, второй направляют главному ветеринарному врачу района. Антиген и сыворотка, утратившие прозрачность, к применению не пригодны. В необходимых случаях допускается получение позитивной контрольной сыворотки в хозяйствах от спонтанно больных норок, давших положительную РИЭОФ с антигеном алеутской болезни норок.
Условия хранения
Антиген и контрольная позитивная сыворотка пригодны к применению в течение 12 месяцев со дня изготовления при условии хранения в темном месте при температуре 3 - 7 °С. Замораживание диагностикума не допускается. По истечении указанного срока хранения неизрасходованный диагностикум проверяют на местах путем определения титра антигена и контрольной позитивной сыворотки. При титре не ниже 1 : 4 антиген разрешается использовать в течение трех месяцев, после чего его необходимо снова проверить. При титре ниже 1 : 4 использование антигена не допускается. Позитивную контрольную сыворотку после истечения срока годности проверяют и при титре не менее 1 : 16 разрешается использовать ее для РИЭОФ в течение трех месяцев, затем ее снова проверяют. При титре менее 1 : 16 сыворотку бракуют.
Производитель
ВЕТЗВЕРОЦЕНТР Фирма НПВ и ЗЦ ЗАО, Россия

Адрес: 129337, г. Москва, Хибинский проезд, д. 2.
Тел./факс: (499) 188-11-36, 188-06-37, 188-97-65

Подробнее о производителе

Продавец
Место Вашей рекламы

   

 

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru

 

 

Ваш источник информации о новых препаратах?

Поделиться:
Крем косметический НОЧКА с ромашкой и календулой
Флай Байт