НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ВЛКРС) МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)

Название (рус.)
НАБОР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА (ВЛКРС) МЕТОДОМ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА)
Состав и форма выпуска
Включает следующие компоненты: две полистироловые 96-луночные микропанели с адсорбированным в лунках специфическим антигеном gp 51 ВЛКРС; положительные контроли: флакон № 1: специфическая сыворотка крови, содержащая антитела к gp 51ВЛКРС - прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета,0,1 мл - 1 флакон; флакон № 3: молоко, содержащее антитела к gp 51 ВЛКРС - жидкость белого цвета, 1 - 2,5 мл - 1 флакон; отрицательные контролия: флакон № 2: нормальная сыворотка крови - прозрачная жидкость соломенно-желтого цвета, 1 - 2,5 мл - 1 флакон; флакон № 4: молоко, не содержащее антитела к gp 51 ВЛКРС - жидкость белого цвета, 2,5 мл - 1 флакон; флакон № 5: промывочный буфер (ФСБТ, фосфатно-солевой буфер, содержащий 0,05 % твина) - концентрированный 20 раствор - бесцветная прозрачная жидкость, 25 мл - 3 флакона; или таблетка, рассчитанная на 500 мл буфера - 4 шт; флакон № 6: буфер для разведения образцов (БР) - бесцветная прозрачная жидкость, 20 мл - 1 флакон; флакон № 7: конъюгат (моноклональные антитела к IgG крупного рогатого скота, меченые пероксидазой), лиофильно высушенный - 2 флакона, каждый из которых содержит таблетку белого цвета; флакон № 8: субстрат - раствор тетраметилбензилина (ТМБ), содержащий перекись водорода, бесцветная прозрачная жидкость, 20 мл - 1 флакон; флакон № 9: стоп-раствор, раствор для остановки реакции - бесцветная прозрачная жидкость, содержащая H2SO4, 10 мл - 1 флакон.
Фармакологические свойства
Антиген gp 51 ВЛКРС, иммобилизованный на поверхности лунок полистироловой микропанели с помощью специфических моноклональных антител, связывается с антителами, присутствующими в исследуемом материале, формируя при этом комплекс антиген-антитело. Полученный иммунный комплекс выявляется после взаимодействия с антивидовым конъюгатом (моноклональные антителам к IgG крупного рогатого скота, меченые пероксидазой), фермент которого после добавления субстрата, вызывает разложение субстрат-индикаторного раствора и образование окрашенного продукта. При этом интенсивность окраски в лунке микропанели пропорциональна ВЛКРС-специфических антител в исследуемой пробе.
Показания
Для выявления антител к вирусу лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) в сыворотке крови и в молоке крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (ИФА).
Дозы и способ применения
Для исследования в лабораторию доставляют из хозяйств индивидуальные сыворотки крови крупного рогатого скота или пробы молока объемом 0,3 - 0,3 мл. Сыворотки можно хранить при температуре 4 °C не более 3 суток или при температуре минус 20 °C в течение 50 - 50 суток. Перед проведением ИФА молоко центрифугируют в течение 15 минут при 2000 - 3000 об/мин для удаления липидов. Для постановки ИФА необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки разных объемов со сменными наконечниками, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода, спектрофотометр (ридер) с фильтром на 450 нм. Перед началом работы микропанели и все компоненты набора выдерживают 20 - 30 минут при комнатной температуре. Неиспользованные реагенты убирают в холодильник (2 - 8 °C) сразу же после проведения исследования. Приготовление рабочих растворов реагентов. ФСБТ. Концентрированный раствор буфера (флакон № 5) разводят в 20 раз дистиллированной водой и тщательно перешивают. Для этого содержимое одного флакона концентрата (25 мл) переносят в мерную колбу и добавляют в нее 475 мл воды. Если в концентрате присутствуют кристаллы, то его перед разведением нагревают и тщательно взбалтывают. Конъюгат. Во флакон № 7 осторожно добавляют 10,5 мл ФСБТ, выдерживают 1 минуту и тщательно перемешивают, сильно не взбалтывая. Готовят непосредственно перед использованием. Все остальные компоненты набора готовы к употреблению. Постановка реакции. Во все используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл БР (флакон № 6), затем эти лунки вносят контрольные и испытуемые пробы, используя для каждого образца новый наконечник. а) Для исследования сывороток крови крупного рогатого скота берут по 4 мкл положительной, отрицательной и испытуемых сывороток и вносят их в соответствующие лунки микропанели; б) для исследования молока крупного рогатого скота по 100 мкл положительной, отрицательной и испытуемых проб молока и вносят их в соответствующие лунки микропанели. После внесения проб содержимое лунок тщательно перемешивают, микропанель помещают в пластиковый пакет или накрывают крышкой и инкубируют 1 ч при 37 °C или 4 ч при комнатной температуре. После инкубации лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают ФСБТ, каждый раз полностью заполняя лунки буфером и вытряхивая содержимое. Затем микропанель подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл раствора конъюгата, микропанель помещают в пластиковый пакет или накрывают крышкой и выдерживают 1 ч при 37 °C. После инкубации проводят процедуру промывания лунок. Во все используемые лунки микропанели вносят по 100 мкл раствора субстрата (флакон № 8) и выдерживают 10 минут при комнатной температуре. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 50 мкл стоп-раствора (флакон № 9). Визуальный учет. Реакция в лунках должна быть следующей: лунки с внесенным положительным контролем должны иметь сине-голубое окрашивание до остановки реакции (желтое после остановки реакции); лунки с внесенным отрицательным контролем должны оставаться бесцветными (до и после остановки реакции); лунки с исследуемыми образцами, в которых присутствуют специфические антитела, должны иметь сине-голубое окрашивание до остановки реакции (желтое после остановки реакции) различной интенсивности в зависимости от уровня антител. Реакцию считают положительной, когда заметна четкая разница в интенсивности окрашивания лунок с исследуемыми образцами и лунок с отрицательным контролем. Инструментальный учет. Для проведения инструментального учета сразу же после остановки реакции проводят измерение оптической плотности (О.П.) продукта в каждой лунке на спектрофотометре (ридере) с вертикальным лучом света при длине волны 450 нм. Далее проводят оценку результатов ИФА. На первом этапе проводят оценку О.П. отрицательного и положительного контроля, входящих в состав набора. Результаты реакции считаются достоверными и могут быть учтены, если контрольные показатели соответствуют следующим критериям: О.П. отрицательного контроля < 0,2; О.П. положительного контроля > 1. Если полученные значения не соответствуют вышеуказанным критериям, результаты ИФА считаются недостоверными и реакцию повторяют. Если О.П. отрицательного и положительного контролей соответствуют вышеуказанным критериям, то далее проводят оценку результатов реакции в лунках с испытуемыми пробами. Относительное содержание антител к ВЛКРС в исследуемых образцах, выраженное в международных ИФА единицах (EU), определяют по отношению значения О.П. испытуемой пробы к значению О.П. положительного контроля по формуле:
EU = (О.П. испытуемой пробы) / (О.П. положительного контроля) x 100
Интерпретацию результатов ИФА проводят с использованием прилагаемой таблицы:
Исследуемый материалЗначение EUИнтерпретация результатов
Сыворотка крови менее 15отрицательная реакция
≥15положительная реакция
Молоко менее 10отрицательная реакция
≥10положительная реакция

Пример расчета содержания антител к ВЛКРС в испытуемых образцах: Контрольные показатели О.П. 450 нм: отрицательного контроля - 0,080; положительного контроля - 2,306. Все показатели соответствуют требуемым критериям. О.П. 450 нм испытуемых сывороток: № 1 - 2,200 и № 2 - 0,090.
EU(1) = 2,200 / 2,306 x 100 = 95,4
EU(2) = 0,090 / 2,306 x 100 = 3,9
Таким образом, в исследуемой пробе сыворотки крови № 1 установлен высокий уровень антител к ВЛКРС (положительная реакция), в сыворотке крови № 2 специфических антител нет, что является отрицательным результатом ИФА. При получении сомнительного результата (например, значение EU в сыворотке крови равно 14 или 16) рекомендуется повторить реакцию и провести исследование пробы в двух параллельных лунках. Следует помнить, что ИФА является высокочувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с внесением образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.
Особые указания
Флаконы без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета подлежат выбраковке. Работу с химическими компонентами набора следует проводить с соблюдением правил техники безопасности. При попадании их на кожу или слизистую оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. Использованные микропанели обеззараживают раствором хлорамина или другими сильным окислителями. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора.
Условия хранения
В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C. Срок годности - 12 месяцев. Не допускается замораживание компонентов.
Производитель
НАРВАК НПО ЗАО, Россия

Адрес: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16.
Тел./факс: (495) 916-10-67, 916-17-05, 916-11-59,
190-75-61, 190-28-72, 190-30-54, 787-69-32, 787-69-33

Подробнее о производителе

Продавец
Место Вашей рекламы

   

 

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru

 

 

Ваш источник информации о новых препаратах?

Результаты

Поделиться: