ВЕТТОРГ ⇨ Каталог препаратов ⇨ НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <РРСС-СЕРОТЕСТ>

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <РРСС-СЕРОТЕСТ>

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

В комплект входят: Планшет для иммуноферментного анализа с адсорбированным в лунках рекомбинантным антигеном rN вируса РРСС - 1 шт. Положительный контроль (K+), 1 мл - 1 фл. Отрицательный контроль (K-) - 1 мл - 1 фл. 20 концентрат фосфатно-солевого буфера с Твином 20 для промывки планшетов (ФСБТ), 4 мл - 2 фл. по 20 мл. Буфер для разведения сывороток (БР), 25 мл - 1 фл. Буфер для разведения конъюгата (БРК), 11 мл - 1 фл. Антитела к иммуноглобулину G(IgG) свиньи, меченые пероксидазой хрена (Конъюгат), 0,5 мл - 1 фл. Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (CP), 5,1 мл - 1 фл. Хромоген, тетраметилбензидин (ТМБ), 5,1 мл - 1 фл. 1 М Серная кислота (Стоп-раствор), 5,1 мл - 1 фл. Компоненты выпускают в закрытых флаконах. В наборе содержится все необходимые для проведения анализа реактивы, за исключением дистиллированной воды. В качестве дополнительного оборудования необходимы микропипетки на 10, 100, 200 и 1000 мкл, мерная лабораторная посуда, суховоздушный термостат с температурой 37 °C, спектрофотометр, с длиной волны 450 нм.

Фармакологические свойства

Основан на взаимодействии иммобилизованного на поверхности лунок планшета рекомбинантного белка вируса РРСС (rN) со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченым пероксидазой хрена специфическим антителами к IgG свиньи). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.

Показания

Предназначен для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) в сыворотке крови иммуноферментным методом с целью диагностики РРСС у невакцинированных животных и оценки напряженности иммунитета после вакцинации. Набор рассчитан для проведения на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых (в 2 повторах) и двух контрольных сывороток (в 2 повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.

Дозы и способ применения

Подготовка биологического материала. Для анализа используют сыворотку крови свиней. Если анализ проводят в течение 24 ч после отбора, образцы биоматериала хранят при температуре 4 °С. При более длительном хранении образцы замораживают при минус 20 °С. Перед исследованием замороженные образцы быстро (в течение 5 - 10 минут) нагревают в водяной бане при температуре 37 С. В случае выпадения осадка пробы обязательно осветляют центрифугированием 10 минут при 2000 g. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается. Подготовка рабочих растворов. Перед началом работы все реагенты выдерживают не менее 0,5 ч при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Рабочий раствор буфера для отмывания планшетов ФСБТ. Содержимое флакона № 4 разводят в 20 раз свежеприготовленной дистиллированной водой. Пример: к 20 мл концентрата добавляют 380 мл воды. При необходимости использования части компонентов следует иметь в виду, что для обработки одного стрипа требуется примерно 30 мл рабочего раствора. Рабочий раствор стабилен при температуре 4 С в течение 3 суток. Рабочий хромоген-субстратный раствор. Раствор хромогена (ТМБ - флакон № 9) разводят субстратным раствором (СР, флакон № 8) в соотношении 1 к 1 и перемешивают. Пример: для получения 2 мл рабочего хромоген-субстратного раствора к 1 мл раствора ТМБ добавляют 1 мл субстратного раствора. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Буфер для разведения сыворотки (БР), № 8 - готов к употреблению. Буфер для разведения конъюгата (БРК), № 6 - готов к употреблению. Положительный контроль (К⁺), № 2 - готов к употреблению. Отрицательный контроль (K^-), № 3 - готов к употреблению. Раствор конъюгата (Конъюгат), № 7 - перед употреблением развести необходимое количество в 20 раз, например, к 0,25 мл конъюгата добавить 4,75 мл БРК. Стоп-раствор (1 М Серная кислота), № 10 - готов к употреблению. Проведение анализа. Исследуемые сыворотки разводят в 50 раз буфером для разведения сывороток (БР). Например, к 245 мкл БР добавляют 5 мкл исследуемой сыворотки. В лунки A 1 - B 1 вносят по 100 мкл K⁺. В лунки C 1 - D 1 вносят по 100 мкл K^-. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл разведенной исследуемой сыворотки (по две лунки на каждый образец сыворотки). Закрывают планшет липкой пленкой и инкубируют 1 ч при 37°C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (доверху заполняя лунки), каждый раз полностью удаляя жидкость постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. При этой операции возможно выпадение стрипов из рамки! Рекомендуется отмаркировать каждый стрип для восстановления из первоначального расположения. В каждую лунку добавляют по 100 мл раствора конъюгата. Планшет закрывают липкой пленкой и инкубируют 1 ч при 37°C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ. Добавляют в каждую лунку по 100 мкл рабочего хромоген-субстратного раствора. Планшет инкубируют в темноте 20 минут при комнатной температуре. Останавливают реакцию добавлением 50 мкл стоп-раствора (1МH₂SO₄). После остановки реакции оптическую плотность субстратной смеси измеряют на спектрофотометре с вертикальным лучом при длине волны 450 нм (A₄₅₀). Учет и интерпретация результатов. Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A₄₅₀) для всех проб K⁺ (A₄₅₀ K⁺_ср). Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A₄₅₀) для всех проб K^- (A₄₅₀ K^-_ср).Вычисляют среднее значение оптической плотности (A₄₅₀) для каждой опытной пробы (ОП) (A₄₅₀ ОПср). Вычисляют коэффициент связывания (K_св) конъюгата сывороточными антителами по формуле:
K_св = (A₄₅₀ ОП_ср - A₄₅₀ K^-_ср)/(A₄₅₀ K⁺_ср - A₄₅₀ K^-_ср) х 100
Величина (A₄₅₀ K⁺_ср - A₄₅₀ K^-_ср) является характеристикой работоспособности набора и должна составлять не менее 0,5. Если эта величина менее 0,5, к полученным результатам следует относиться как к сомнительным и, по возможности, повторить анализ. Пробу считают отрицательной, если величина KK_св менее 30 %. Если величина KK_св более 30 %, пробу считают положительной.

Особые указания

Буферные растворы и стандарты содержат токсические консерванты - мертиолят и азид натрия. Не допускайте попадания их внутрь и на слизистые оболочки. Серная кислота вызывает раздражение при попадании на кожу и слизистые оболочки. Так как развитие гуморального иммунитета начинается на 25 - 30 день после вакцинации, анализ на наличие антител к вирусу РРСС рекомендуется проводить через 25 дней после вакцинации. Для получения достоверных результатов, рекомендуется исследовать группы животных (не менее 10 голов), одинаковых по условиям содержания, возрасту и т. д. Не использовать объединенные сыворотки от разных животных.

Условия хранения

В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C и относительной влажности не более 80 %. Замораживание реагентов набора не допускается. Все компоненты набора стабильны до истечения срока годности. Оставшиеся после частичного использования компоненты должны храниться плотно закрытыми в заводской упаковке. Не переливать в другую посуду. Не смешивать компоненты из наборов разных серий.

Производитель

НАРВАК НПО ЗАО, Россия

Адрес: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16.
Тел./факс: (495) 916-10-67, 916-17-05, 916-11-59,
190-75-61, 190-28-72, 190-30-54, 787-69-32, 787-69-33

Подробнее о производителе

Продавец

Место Вашей рекламы

По вопросам размещения информации

о ветеринарных препаратах и кормовых добавках

в Электронном справочнике "Ветеринарные препараты в России"

и заключения договоров на публикацию

обращайтесь в ООО "Ветторг" по электронной почте: vettorg@mail.ru